蛋白组学套餐

 

 

DIA+PRM技术
 
Nature Methods 关注技术|新一代蛋白组技术+WB替代技术
随着质谱仪器的不断更新换代,蛋白组学的技术也不断的革新
从最早的2-D电泳技术到基于LC-MS/MS的蛋白定性
从Label free 技术到标记定量iTRAQ/TMT技术以及时下备受推崇的DIA/SWATH技术、PRM/MRM技术
每一次的技术革新都使得蛋白组学研究更上一阶
蛋白DIA定量分析技术也被《Nature Methods》杂志评为最值得关注的技术之一
 
 
 

 

 

实验原理
 
DIA技术:先利用常规DDA质谱检测技术分析建立图谱库,之后采用DIA方法进行质谱数据采集,从而实现对样品中蛋白质的定性及定量,不同于传统的DDA技术,DIA技术将质谱整个全扫描范围分为若干个窗口,高速、循环地对每个窗口中的所有离子进行选择、碎裂、检测,因此可以无遗漏地获得样本中所有离子的全部碎片信息,数据利用度大大提高,缺失值更少。因此,DIA技术更适合于大样本量、复杂体系的蛋白检测。
 
PRM技术:平行反应监测(Parallel Reaction Monitoring) 是一种基于高分辨、高精度质谱的离子监视技术,能够对目标蛋白质、目标肽段(如发生翻译后修饰的肽段)进行选择性检测,从而实现对目标蛋白质/肽段进行相对或绝对定量。PRM技术是基于质谱的靶向验证蛋白组学技术,完美的替代了基于抗体的Western blot、ELISA等。PRM技术运用平行反应监测技术特异性地选择与预先设定质荷比相同的肽段离子并进行定量,可以有效排除干扰离子,提高蛋白质的定量准确性。
 
 

 

 

技术的特点
 
 DIA优势
DIA技术是基于质谱的新一代蛋白组学技术,DIA技术采用数据非依赖性采集扫描模式,摆脱了传统DDA(代表性技术:iTRAQ/TMT)扫描的偏好性制约,可以无遗漏地获得样本中所有离子的碎片信息,以达到样本数据的完整性。
 
DIA技术较传统的iTRAQ/TMT/Labelfree蛋白组技术而言,具有如下优势:
1. 保证了数据的完整性,缺失值少。 
2. 克服了iTRAQ/TMT的通量低的限制。 
3. 提高了低丰度蛋白的检出率。 
4. 鹿明生物基于Thermo公司的QE-HF高端质谱,检出率提升20%以上
 
PRM优势
 
PRM技术较传统的Western blot、ELISA等靶向蛋白验证技术具有如下优势:
1. 克服了抗体制备难,买不到抗体的困境。  
2.PRM技术与DIA/iTRAQ/TMT技术都是基于质谱技术,对于组学的结果验证率有很大改善。 
3. 一次针对30个左右的目的蛋白进行精确靶向定量。
 
 
 

 

 

实验流程
 
DIA实验流程
 
 
PRM实验流程
 
 
 

 

 

仪器设备
 
鹿明生物基于Thermo公司的QE-HF高端质谱,检出率提升20%以上。
 
 
 
立即咨询