蛋白质组定量分析

 
 
iTRAQ同位素标记定量技术
 
iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术是由美国应用生物系统公司AB研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用4种或8种同位素的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,然后进行串联质谱分析,可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量。
 
 

 

 

实验原理

 

iTRAQTM试剂在结构上包括3个化学基团,分别是报告基团、平衡基团和反应基团。(如下图1)

 

 
 
4plex iTRAQ分子结构
 
不同样品的同一肽段经iTRAQ试剂标记后具有相同的质量数,并在一级质谱检测(MS1)中表现为同一个质谱峰。当此质谱峰被选定进行碎裂后,在二级质谱检测(MS2)中,不同的报告基团被释放,它们各自的质谱峰的信号强弱,代表着来源于不同样品的该肽段及其所对应的蛋白的表达量的高低。
 
 

 

 

iTRAQ技术的特点 

 

1:通量高

可一次性分析4、8个样品

 

2:重复性好

所有样品的分离鉴定条件一致

 

3:数据丰富

可获得所有蛋白的定性和定量信息

 

4:自动化程度高

以高分辨率液质联用为基础,自动化操作,分析速度快

 

5:定量准确

减少了样本处理、以及不同组上机造成的实验误差,因此能达到定量更准确的效果

 

6:灵敏度高

可检测到表达丰度为皮克(pg)级的蛋白,无高丰度蛋白样本(血液、脑脊液、肌肉组织、骨组织等)可检测

 

 

 

 

 

实验流程

 

注:以iTRAQ 8标为例

 

 

 

 

样本类型及含量要求

 

1 蛋白质提取物 浓度>1μg/μg(最好是4μg/μg)蛋白总量>300μg
2 细胞样品 细胞量>107
3 组织样品   动物组织>100mg;植物物质>200mg
4 液体样本 血液体积>100μg,尿液>10ml,唾液>1ml

 

 

         

         

送样要求         

         

1

在允许的条件下,实际样品准备量应适当比最低样品量多准备一些。

2

收集样品时做好分装标记,并尽快放在液氮中冻存或转移至-80度冰箱长期保存,避免反复冻融。远距离寄样时建议用顺丰运输。

3

生物学重复的样品一定要标记清楚,建议可以用:-1、-2、-3的方式来标记。

 

 

 

 
 
仪器设备
 
Thermo Q-Exactive高分辨质谱 
 
 
 
Sciex Triple TOF 6600质谱仪
 
 

 

 

服务流程

 

 

 

 

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