脂质组学

 

 

脂质组学
lipidomics
 
脂质是自然界中存在的一大类极易溶解于有机溶剂、在化学成分及结构上非均一的化合物
主要包括脂肪酸及其天然发生的衍生物,以及与其生物合成和功能相关的化合物
脂质组学是代谢组学的一个分支,一般认为脂质组学是研究生物体内所有脂质分子的特性,以及它们在蛋白表达和基因调控过程中作用的学科
目前已建立的脂质组学分析方法较多,较先进的软电离质谱(ESI-MS)能对脂质分子进行定性和定量分析,已成为脂质组学强有力的工具
 
 

 

 

脂质分类
 
LIPID MAPS®系统命名包括了八大类脂质:脂肪酸类(如亚油酸、花生酸等)、甘油脂类(如TG、DG等)、甘油磷脂类(如PC、PE、PG、PA等) 、鞘脂类(如Cer、SM等)、固醇脂类(如固醇酯等)、糖脂类(如MGDG、SQDG等)、孕烯醇酮脂类(如CoA等)和多聚乙烯类(抗生素等)
 
从脂质的研究方法来看,目前已经建立的脂质分析方法较多。主要有薄层色谱(thin-layer chromatography,TLC)法、气相色谱质谱联用(gas chromatography-mass spectrometer,GC-MS)法、电喷雾电离质谱(electrospray ionizationmass spectrometry,ESI-MS)法、基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorp-Uon /ionization-time of flight mass spectrometry,MALDITOF-MS)法和核磁共振(nucIearmagnetic resonance,NMR)法等。较先进的ESI-MS法能对脂质的分子种进行定性和定量分析,已经成为脂质分析的强有力工具。
 
 

 

 

实验流程

 

 

 

 

 

脂质提取方法
 
1.将细胞用600 μL甲醇-水=1:1(V/V)转移至10 mL 玻璃小瓶中,加20 μL内标(Lyso PC 17:0, 浓度为0.1 mg/mL 甲醇配置),加入600 μL氯仿,超声破碎;
2.细胞超声破碎后的溶液在冰水浴中提取10 min;
3.将所有液体转移到LC-MS 进样小瓶中,4°C静置30 min;
4.液体分层,取下层液体(氯仿层) 600 μL,(若未能明显分层,则需要离心使其分层)转移到另一高回收率GC-MS进样小瓶中;真空挥干;
5.在取完下层溶液的离心管中继续加入600 μL氯仿-甲醇=2:1(V/V),漩涡震荡30 s;冰水浴中超声提取10 min;
6.4°C静置30 min后,取下层液体,继续放入原来的GC-MS小瓶中挥干;
7.挥干后,GC-MS小瓶中的脂质残渣用300 μL异丙醇-甲醇=1:1(V/V)复溶(涡旋30 s,超声3 min),将溶液转移至1.5 mL的离心管中,12000 rpm,4度,离心15 min 后,取200 μL 上清液装入带内衬管的LC-MS进样小瓶中,用于LC-MS分析;
 
 

 

 

仪器设备
 
 
Waters ACQUITY UPLC I-Class 超高效液相色谱系统
 
 
 
Waters Vion IMS QTOF
 
 
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